Growth kinetics by scanning of granulocytic cell colonies in glass capillaries

Abstract

Pure granulocytic colonies were cultivated from mouse bone marrow cells in agar contained in glass capillary tubes using mouse embryo conditioned medium as colony stimulating activity. A random distribution of colonies along the agar gels was achieved under controlled conditions. Only 3 capillaries were needed for a coefficient of variation around 5% provided at least 10⁴ cells were seeded per capillary. The daily growth of single colonies within an agar capillary was followed, using the light scattering properties of the colonies for automatic scanning. The position of the colonies in the capillary greatly affected the scan signal; the consequences of positional changes were studied in detail. Using the mean peak height as growth parameter, the onset of measureable granulocytic colony growth was found between day 2 and 3, the maximum colony size was reached between day 7 and 9, after which the colonies decayed. Other parameters such as colony count and total peak area were determined and their significance discussed. Reine Granulozytenkolonien wurden aus Mäuseknochenmarkzellen in Agar enthaltenden Glaskapillaren mittels Mäuseembryo-konditioniertem Medium als Kolonie-stimulierender Aktivität gezüchtet. Unter kontrollierten Bedingungen wurde eine statistisch gleichmäßige Verteilung der Kolonien in den Agar-Gelen erzielt. Nur 3 Kapillaren waren notig, um einen Variationskoeffizient von etwa 5% zu erreichen, vorausgesetzt, daß mindestens 1O⁴ Zellen pro Kapillare ausgesät wurden. Das tägliche Wachstum einzelner Kolonien innerhalb einer Kapillare wurde durch automatische Registrierung der an den Kolonie-Zellen erzeugten Lichtstreuung verfolgt. Die Position der Kolonien in den Kapillaren beeinflußt die Signalhöhe; die Folgen von Positionsänderungen wurden im einzelnen untersucht. Mit der mittleren Signalhöhe als Wachstumsparameter wurde der Beginn des meßbaren Granulozytenkoloniewachstums zwischen dem 2. und 3. Tag u+nd die maximale Koloniegröße zwischen dem 7. und 9. Tag gefunden, wonach die Kolonien zerfielen. Weitere Parameter wie Koloniezahl und Signalfl:ache wurden bestimmt und ihre Bedeutung diskutiert.