Flow cytometry (FCM) of human epidermal cells

Abstract

A suction blister technique on the abdominal skin to separate pure human epidermis from its basement membrane is described. After incubation with proteolytic enzymes (trypsin, pepsin) and mechanical shaking, isolated cells and nuclei were stained with ethidium bromide. DNA-specific fluorescence was measured in a flow cytometer using UV excitation light. Cell-cycle phase distributions were obtained from the resulting histograms using a planimetric method. The proportion of cells with an S-phase DNA content showed circadian variations with peak values shortly before noon, and lower values during the rest of the 24 h period. Es wird die Saugblasen-Technik an der Bauchhaut beschrieben, die in der Lage ist, die epidermalen Zellen oberhalb der Basalmembran zu gewinnen. Isolierte Zellen und Nuclei werden nach Inkubation mit proteolytischen Enzymen, wie Trypsin und Pepsin gewonnen und in Ethidium-Bromid gefärbt. Eine DNA-spezifische Fluorescenz wurde durch UV-Anregung im Cytometer gemessen. In anschließenden Histogrammen wurde durch Anwendung einer planimetrischen Methode die Phase des Zellcyclus bestimmt. Im Verlaufe circadianischer Variationen wiesen Zellen in der S-Phase kurz vor Mittag die höchsten Werte auf, während in der übrigen Periode im 24 h-Rhythmus die Werte niedriger lagen.