The counting and sizing of spermatozoa from ten animal species using a coulter counter

Abstract

Zusammenfassung Zählung und Größenbestimmung von Spermien zehn verschiedener Tierspezies mit einem Coulter Counter Genau geeichte Coulter Counters (Modelle Z_B Industrial und F) wurden benutzt, um Größe und Zahl von Spermatozoen vor und nach Zaponinbehandlung zu bestimmen. Begleitende Partikel, Tröpfchen und peripheres Spermacytoplasma wurden durch die Zaponinbehandlung aufgelöst. Spermaproben aus der cauda epididymidis des Kaninchens, Meerschweinchens, Hamsters sowie der Ratte und der Maus, waren frei von Begleitpartikeln und konnten ohne Zaponinbehandlung bestimmt werden. Wenn Meerschweinchensperma in isotonische Lösung gebracht wurde, schwollen die Akrosomen schnell an und die Größenbestimmung konnte erst nach Erreichen eines Gleichgewichtszustandes durchgeführt werden. Zaponinbehandlung föhrte zu vollständiger Auflösung von Ratten- und Hamsterspermatozoen innerhalb von Sekunden und zu 50%iger Auflösung von Mäusespermatozoen. Spermatozoen aus der cauda epididymidis des Ochsen waren von unspezifischen Partikeln begleitet, welche eine Größenbestimmung ohne Zaponinbehandlung schwierig machten. Das Ochsensperma enthielt keine Population cytoplasmatischer Tröpfchen und die Cytoplasmamenge der Spermien war, wie durch die Entfernung des Cytoplasmas mit Zaponin gezeigt wurde, geringer als bei allen anderen Spezies. Die Größe der Spermatozoen im Ejakulat des Hundes war sehr unterschiedlich, je nachdem ob die Spermien mit cytoplasmatischen Tröpfchen behaftet waren oder nicht, aber nach der Zaponinbehandlung waren alle Spermatozoen etwa gleich groß. Das Ejakulat vom europäischen Wildeber enthielt eine Population kleiner Tröpfchen, die sich in ihrer Größe genügend von den Spermatozoen unterschieden, um eine getrennte Zählung und Größenbestimmung von Spermien und Tröpfchen ohne Zaponinbehandlung durchführen zu können. Das Ejakulat des Rhesus-Affen mußte inkubiert werden, um die Spermatozoen aus dem Spermagerinsel zu befreien und dann Zahl und Größe zu bestimmen. Die Spermatozoengröße hing geringfügig von der Inkubationsdauer ab. Die Ejakulate vom Kaninchen und Menschen waren so stark mit unspezifischen Partikeln verunreinigt, daß man eine Zählung und Größenbestimmung der Spermatozoen ohne Zaponinbehandlung nicht durchführen konnte. Das Verhältnis von Partikelmenge zu der Zahl der Spermatozoen war äußerst variabel. Die Partikel wurden von den Spermatozoen durch Einwandernlassen der beweglichen Spermatozoen in eine Gradiente von Rinderserumalbumin abgetrennt. Auf diese Weise konnten erstmalig unbehandelte Spermatozoen des Menschen gemessen werden. Die Verteilungskurven von Spermiengrößen aller zehn geprüfter Spezies, vor und nach Zaponinbehandlung, waren linksschief. Ohne Zaponinzusatz waren die Gipfel der Kurve breiter und flacher. Spermiengrößen wurden als Volumina der Spermien und als Durchmesser dieser Volumina (bei sphärischer Form) von allen Spezies angegeben, sowohl am Modus wie auch Mittelwert der Verteilungskurven. Nach Zaponinbehandlung betrug das mittlere Volumen 15–30 μm³ entsprechend einem Durchmesser von 3–4 μm bei sphärischem Volumen. Vor Zaponinbehandlung war das Volumen aller Spermientypen um mindestens 20% größer und das mittlere Volumen lag zwischen 25 und 190 μm³. Resumen Contaje y medida de los espermatozoides de diez especies mediante un Contador de Reja Contadores de Reja, minuciosamente calibrados, modelos industriales Zb y F, se emplearon para contar y medir espermatozoides antes y después del tratamiento con Zaponin que lisa los restos acompañantes: gotas y citoplasma espermático. Las muestras espermáticas de la cola del epididimo del conejo, cobayo, hamster, rata y ratón no tenían restos y se pudieron medir sin tratamiento con Zaponin. El gran casquete acrosómico del cobayo se hinchó rápidamente cuando los espermatozoides se introdujeron en solución isotómica y la medida sólo fue posible después de alcanzar el equilibrio. El tratamiento con Zaponin disolvió por completo los espermatozoides de rata y hamster y cerca del 50% de espermatozoides del ratón, en pocos segundos. Los rspermatozoides de la cola del epididimo del toro, presentaban algunos restos inespecíficos que hicieron dificil determinar su tamaño sin tratamiento con Zaponin. No había gotas citoplásmicas y entre las especies exáminadas, mostró, por la extracción con Zaponin, la menor cantidad de citoplasma. El tamaño espermático en eyaculados de perro osciló considerablemente, dependiendo de si habían gotas citoplásmicas, pero después del tratamiento con Zaponin todas las muestras tenian casi el mismo tmaño. Las muestras de eyaculado del jabali europeo contenian una población de pequeñas gotas que eran suficientemente diferentes en tamaño de los espermatozoides, para permitir contarlos y medirlos separadamente sin tratamiento con Zaponin. Las muestras de eyaculado del mono Rhesus requirieron una incubación para liberar los espermatozoides del coagulo, antes de que se pudiesen contar y medir. El tamaño varió ligeramente de acuerdo a la duración de la incubación. Las muestras de eyaculado de conejo y hombre estaban tan contaminadas con restos, que no fue posible contarlas y medirlas sin tratamiento con Zaponin. La relación entre la cantidad de restos y en número de espermatozoides era extremadamente variable. En las muestras humanas los restos fueron separados de los espermatozoides por...