An analysis of pancreatic enzymes used in epidermal separation

Abstract

A comparative enzyme analysis was performed on 3 pancreatic extracts generally used for dermal-epidermal separation, namely, crude trypsin (Difco), crude trypsin (Sigma) and pancreatin. A fourth pancreatic extract, crude lipase, was subjected to a corresponding analysis. The 4 extracts were assayed for activities of: protease (total), trypsin, chymotrypsin, carboxypeptidase-A, amylase, elastase, lipase, esterase, arylesterase and ribonuclease. Relative activities of the different proteolytic enzymes were individualized by utilizing specific inhibitors. Insignificant differences were observed between the enzyme activities of crude trypsin (Difco) and pancreatin. Crude lipase displayed similar enzyme activities as these two extracts in addition to high lipolytic, esterolytic and arylesterolytic activities. Crude trypsin (Sigma) exhibited higher tryptic and chymotryptic activities than the other extracts but lacked all further enzyme activities. Epidermal separation was performed using similar incubation conditions for each extract and skin from the same donor. Ultrastructural examination of the detached epidermis revealed that a more effective separation could be achieved by crude lipase. Für die biochemische Abtrennung der Epidermis vom Corium verwendet man üblicherweise einen der folgenden drei Pankreasextrakte: Crude Trypsin (Difco), Crude Trypsin (Sigma) oder Pankreatin. Die drei Extrakte werden auf ihren Enzymgehalt untersucht und miteinander verglichen. Der gleichen enzymatischen Analyse wird ein vierter aus dem Pankreas stammender Extrakt unterzogen: Crude Lipase. In allen vier Extrakten werden die Aktivitäten für folgende Enzyme gemessen: totale Protease, Trypsin, Chymotrypsin, Carboxypeptidase-A, Amylase, Elastase, Lipase, Esterase, Arylesterase und Ribonuklease. Unter diesen Enzymen wirken mehrere proteolytisch; ihre relativen Aktivitäten werden mit Hilfe spezifischer Hemmstoffe untersucht. Unbedeutende Unterschiede finden sich in den Enzymaktivitäten von Crude Trypsin (Difco) und Pankreatin. Ähnliche Enzymaktivitäten wie diese beiden Extrakte besitzt auch Crude Lipase, darüber hinaus aber noch eine hohe lipolytische, esterolytische und arylesterolytische Aktivität. Crude Trypsin (Sigma) zeigt unter allen vier Pankreasextrakten die höchste tryptische und chymotryptische Aktivität, besitzt aber sonst keine weiteren nachweisbaren Enzyme. Mit jedem der vier Extrakte werden an der Haut des gleichen Spenders und unter ähnlichen Inkubationsbedingungen epidermale/coriale Trennungen durchgeführt. Die Untersuchung der losgelösten Epidermis mit dem Elektronenmikroskop zeigt, daß mit Crude Lipase eine optimal saubere Trennung erzeugt werden kann.