Eine vereinfachte Fettgewebsmethode zur Insulinbestimmung im Serum

Abstract

The present study presents a simplified method for the measurement of insulin-like activity through its effect on stimulation of glucose-1-¹⁴C oxidation by adipose tissue. Forty determinations can be carried out by two persons in a single day and only two rats are required. The index of precision is in the neighbourhood of 0.13. When the method was applied to the measurement of total insulin-like activity in dialyzed human serum obtained from fasting subjects, the results obtained varied between 78-1020 μU/ml (465 ± 68 μU/ml). Approximately 40 per cent of the total insulin-like activity was suppressible in the presence of insulin antibodies partially purified from guinea pig serum. This was true both for dialyzed serum from fasting subjects and for acid ethanol extracts of serum. There was no increase in the insulin-like activity of serum upon dilution, provided that the radioactivity of the¹⁴CO₂ formed was directly plotted against the decreasing serum concentrations. A fictitious increase in the insulin-like activity was obtained, however, when the radioactivity was transformed into insulin equivalents by comparison with a standard curve in buffer. It would seem that this is the result of the observation that insulin standard curves in the presence of serum are flatter than is the case in Krebs-Ringer buffer. Ce travail présente une simplification de la méthode de la mesure de l'activité insulinique sérique basée sur l'oxydation du glucose-1-¹⁴C par le tissu adipeux. Avec cette méthode deux personnes peuvent procéder à 40 dosages en une journée en utilisant deux rats seulement. L'index de précision est de l'ordre de 0,13. L'application de la méthode à la mesure de l'activité insulinique du sérum humain dialysé révèle la présence de 78 à 1020 μU/ml (465 ± 68 μU/ml). Environ 40% de cette activité insulinique totale s'est révélé être supprimable par l'adjonction d'anticorps anti-insuline purifiés à partir de sérum de cobaye. Les mêmes résultats ont été obtenus tant pour le sérum humain obtenu à jeun et dialyse que pour des extraits éthanoliques de ces sérums. Lorsqu'on reporte graphiquement la radioactivité du¹⁴CO₂ produit en proportion de la dilution du sérum, on n'observe pas une augmentation de l'activité insulinique résultant de cette dilution. Par contre, une augmentation est observée lorsqu'on rapporte non pas directement la radioactivité du¹⁴CO₂ mais l'activité insulinique correspondante obtenue par comparaison avec des courbes standards dans un tampon. Ceci paraît dû au fait que la pente des courbes standards d'insuline obtenues en présence de sérum est plus faible que celle des courbes obtenues dans le tampon de Krebs-Ringer. In vorliegender Arbeit wird eine vereinfachte, auf der Stimulation der 1-¹⁴C-Glucose-oxydation beruhende Fettgewebsmethode zur Insulinbestimmung im Serum beschrieben. Zwei Personen können an einem Tag 40 Einzelbestimmungen durchführen, wofür nur zwei Ratten benötigt werden. Der Präzisionsindex liegt bei 0.13. Die Anwendung der Methode auf die Bestimmung der gesamten Insulinaktivität in dialysierten menschlichen Nüchternseren ergab Beträge von 78 — 1020 μE/ml (M = 465±68 μE/ml). Mit angereicherten Insulinantikörpern aus Meerschweinchenserum waren etwa 40% der gesamten Insulinaktivität hemmbar. Dies wurde sowohl in dialysierten menschlichen Nüchternseren, als auch in HCl-Äthanolextrakten aus Serum gefunden. Eine Zunahme der Insulinaktivität durch Serumverdünnung ist nicht zu beobachten, wenn man die Radioaktivität des entwickelten¹⁴CO₂ gegen fallende Serumkonzentrationen aufträgt. Eine Aktivitätssteigerung wird jedoch vorgetäuscht, wenn die Impulse über eine Krebs-Bicarbonat-Ringerlösung-Insulin-Eichkurve in μE umgewandelt werden. Der Grund hierfür ist darin zu suchen, daß die Insulineichkurven in Anwesenheit von Serum flacher verlaufen, als in serumfreier Krebs-Bicarbonat-Ringerlösung.