Isolierung und Charakterisierung eines neuen plazentaspezifischen Proteins (PP10)

Abstract

PP₁₀ was isolated from aqueous extracts of human term placentae by fractionating the proteins with rivanol and ammonium sulfate, by gelfiltration on Sephadex G-150 and by use of immunoadsorbents. PP₁₀ apparently is a protein specific for the placenta; it could not be detected in extracts from other human tissues. From one human term placenta an average amount of 20 mg PP₁₀ can be extracted. In sera from pregnant women PP₁₀ is usually present only in trace amounts (< 0.1 mg/100 ml). PP₁₀ has the electrophoretic mobility of an α₁-globulin and an isoelectric point of 5.1. The purified protein sediments with 3.8 S. PP₁₀ was found to have a molecular weight of 48,000 as determined by ultracentrifugation and a molecular weight of 65,000 as determined by SDS-PAA gel electrophoresis. PP₁₀ is a glycoprotein containing 6.65% carbohydrates (hexoses 4.8%, hexosamines 1.2%, fucose 0.05%, sialic acid 0.6%). The amino acid composition of PP₁₀ has been determined, too; the most abundant amino acids in this protein are glutamic acid, aspartic acid, leucine and alanine. PP₁₀ wurde aus dem wäßrigen Extrakt reifer menschlicher Plazenten isoliert; bei seiner Reinigung wurde die fraktionierte Fällung der Proteine mit Rivanol und Ammoniumsulfat, die Gelfiltration an Sephadex G-150 und die Methode der Immunadsorption angewandt. PP₁₀ ist offensichtlich spezifisch für die Plazenta; im Extrakt von anderen menschlichen Organen konnte dieses Protein nicht nachgewiesen werden. Aus einer ausgewachsenen menschlichen Plazenta lassen sich im Durchschnitt 20 mg PP₁₀ extrahieren. Im Serum schwangerer Frauen kommt PP₁₀ im allgemeinen nur in Spuren (< 0,1 mg/100 ml) vor. PP₁₀ hat die elektrophoretische Beweglichkeit eines α₁-Globulins und einen isoelektrischen Punkt von 5,1. Das gereinigte Protein sedimentiert in der Ultrazentrifuge mit 3,8 S. In der Ultrazentrifuge wurde für PP₁₀ ein Molekulargewicht von 48 000, im SDS-haltigen Polyacrylamidgel ein Molekulargewicht von 65 000 ermittelt. PP₁₀ ist ein Glykoprotein und enthält 6,65% Kohlenhydrate (Hexosen 4,8%, Hexosamine 1,2%, Fucose 0,05%, Neuraminsäure 0,6%). Die Aminosäurenzusammensetzung des Proteins wird ebenfalls mitgeteilt. Die in der Peptidkette am häufigsten vorkommenden Aminosäuren sind Glutaminsäure, Asparaginsäure, Leucin und Alanin.